第1434章 摸著石頭過河（2/2）

「明白！「

體外驗證開始。

韋伯親自主刀，從M7的脊髓損傷區取了一小塊組織，大約兩立方毫米，放在冰冷的人工腦脊液中，切成了三百微米厚的薄片。這些薄片被轉移到培養皿中，保持存活狀態，可以持續記錄電生理活動四到六個小時。

病毒載體是AAV9-hSyn-NpHR-EYFP，一種經過改造的腺相關病毒。AAV9對神經元有高度的嗜性，hSyn啟動子確保NpHR只在神經元中表達，EYFP作為螢光標記，方便在顯微鏡下觀察轉染效率。

韋伯把病毒溶液滴在脊髓切片上，孵育兩個小時。然後用PBS沖洗三遍，放在共聚焦顯微鏡下觀察。

「轉染效率，「他調整著焦距，「大約百分之三十五。「

「百分之三十五，「曼因斯坦在旁邊記錄，「夠嗎？「

「理論上，脊髓背角的抑制性中間神經元占總神經元數量的百分之二十到三十。百分之三十五的轉染效率，意味著大部分抑制性神經元都能被靶向，足夠了。「

下一步是電生理驗證，韋伯把一片轉染過的脊髓切片放到電生理記錄槽中，用玻璃微電極記錄背角神經元的自發放電。同時，他在切片的上方放置了一根直徑兩百微米的光纖，連接到一台黃色雷射器上。

「基線放電頻率，「他看著示波器，「每秒五赫茲，正常範圍。「

然後他打開了雷射器。一束微弱的黃光透過光纖，照射在脊髓切片的表面。

「光強，一毫瓦每平方毫米，波長，五百九十納米。「

示波器上的波形變了，自發放電頻率從每秒五赫茲降到了每秒一赫茲，降幅百分之八十。

「抑制效果確認，「韋伯的聲音很平靜，但曼因斯坦注意到他的手微微顫抖，「NpHR被激活後，氯離子內流，神經元超極化，放電減少。「

「可逆嗎？「楊平問。

韋伯關掉雷射器，十秒鐘後，放電頻率恢復到每秒四點八赫茲。

「完全可逆。「

會議室里爆發出一陣壓抑的歡呼。唐順和漢斯擊了一下掌，莉娜在筆記本上飛快地敲著字，伊娃難得地露出了一絲微笑。

但韋伯沒有笑，他盯著那片脊髓切片，看了很久，然後說：「這只是體外，體內的環境複雜得多，炎症、免疫反應、膠質瘢痕、血流變化。體外成功，不代表體內能成功。「

「我知道，「楊平說，「但我們至少證明了，這個方向是對的，科研就是摸著石頭過河。「

「摸著石頭過河？」

韋伯捉摸著這句話，他讚嘆：

「這是富有哲理的一句話。」

緊接著，體內實驗也開始進行。

這一次，手術的規模比前兩次都大。楊平主刀，曼因斯坦協助，伊娃負責電生理監測，漢斯負責病毒注射和光纖植入，韋伯在台下觀摩。

手術的第一步，是病毒注射。漢斯用一根玻璃微注射針，把五微升AAV9-hSyn-NpHR-EYFP溶液緩慢地注入M7的脊髓背角，雙側，每個注射點一微升，共十個注射點。注射的速度極慢，每分鐘零點一微升，以避免壓力損傷。

「病毒注射完成，「漢斯匯報，「等待十五分鐘，讓病毒擴散。「

十五分鐘後，第二步，光纖植入。伊娃設計了一套微型光纖陣列，四根光纖，直徑各兩百微米，排列成一個菱形，覆蓋脊髓背角的主要區域。光纖的末端連接到一個皮下植入的LED模塊上，模塊由無線充電供電，可以通過外部控制器調節光強和頻率。

「光纖植入完成，「楊平說，「閉合切口。「

手術持續了一個多小時。當M7從麻醉中醒來時，它的後肢肌力沒有變化，病毒和光纖本身不會影響運動功能。但所有人都知道，真正的考驗還沒有開始。

NpHR的表達需要時間。病毒進入神經元後，需要三到五天才能表達出足夠的蛋白。所以術後第五周的前半周，是等待期。

等待的日子裡，研究所的氣氛緊張得像一根繃緊的弦。每天早上，伊娃都會給M7做電生理監測，記錄脊髓背角的自發放電頻率。前三天，數據沒有明顯變化，NpHR還沒有表達足夠。

第四天，變化出現了。

M7的背角自發放電頻率從正常的每秒三到五赫茲，突然升到了每秒十二赫茲。這是一個危險的信號，異常高頻放電，意味著中樞敏化正在形成。

「啟動光刺激，「韋伯說。

伊娃按下了控制器的按鈕，黃色的光通過光纖，照進M7的脊髓背角。

十秒鐘後，放電頻率降到了每秒六赫茲。二十秒後，降到了每秒四赫茲。一分鐘後，穩定在每秒三點五赫茲，比基線還低，說明抑制效果良好。

「有效，「韋伯的聲音傳來，帶著一絲顫抖，「光遺傳學閉環調控，有效。「

楊平長長地出了一口氣，他看著控制器上那個小小的黃色指示燈，覺得那是我見過的最美的光。

其實科研就是這樣，摸著石頭過河，誰也不知道結果怎麼樣，只能邊走邊調整，慢慢地就走通一條路。如果沒有大膽的開始，無論如何也不會有正確的路。